Ähnlich wie in „Werwölfe von Düsterwald“ treten in „Disney Villains – Versammlung des Bösens“ zwei Teams gegeneinander an, mit dem Ziel sich gegenseitig auf die Schliche zu kommen bzw. genau dies zu verhindern. Doch sind es hier nicht Menschen gegen Werwölfe, sondern die legendären Disney Bösewichte und ihre Schergen, aufgeteilt auf Team Unheil und Team Chaos.

Die Teamzugehörigkeit richtet sich nicht wie bei den Werwölfen danach, welchen Charakter man gezogen hat, sondern nach einer Gesinnungskarte, die separat ausgeteilt wird. So verteilen sich die Charaktere und die dazugehörigen Sonderfähigkeiten nach dem Zufallsprinzip auf die beiden Teams, was dem Spiel eine tolle Varianz verleiht.

Team Unheil verbannt in jeder Nacht ein Mitglied aus Team Chaos und versucht tagsüber seine wahre Identität mit allen Mitteln zu verbergen. Team Chaos dagegen versuchen tagsüber herauszufinden, wer zum Team Unheil gehört, um die Mitgleider ebenfalls zu verbannen. Die Bösewichte verfügen über spezielle Sonderfähigkeiten. So kann beispielsweise Malefiz in der Nacht einen Spieler bestimmen, der seine Gesinnung Malefiz Schergen Diablo verraten muss. Dieser wiederum hat nun die Wahl, ob er Malefiz die Wahrheit sagt oder ihn anlügt.

Der Spielablauf selber gestaltet sich ähnlich wie bei „Werwölfe von Düsterwald“. Zunächst mischt der Spielleiter alle Charakter- und Gesinnungskarten und teilt je eine davon an jeden Spieler aus. Nun sehen die Spieler, welchen Charakter sie gezogen haben und welche Gesinnung sie innehaben. Die Anzahl der Spieler in Team Unheil richtet sich nach der Gesamtanzahl der Spieler, wobei bei einer maximalen Spielerzahl von 12 Spielern, höchstens drei Spieler im Team Unheil spielen. Dann beginnt die Nacht, alle Spieler schließen die Augen und das Spiel nimmt seinen Lauf.

Nach und nach erwachen nun die Spieler in einer festgelegten Reihenfolge und öffnen ihre Augen. Die Spieler haben dann abhängig von den Sonderfähigkeiten ihres Charakters verschiedene Möglichkeiten um zu agieren. Ziel dabei bleibt es, durch den cleveren Einsatz der Sonderfähigkeiten die gegnerischen Spieler als solche zu entlarven und die Spieler des eigenen Teams davor zu schützen entlarvt und verbannt zu werden. Anschließend beginnt der Tag. Alle Spieler öffnen wieder ihre Augen. Jetzt müssen die Mitglieder von Team Unheil versuchen sich so unauffällig wie möglich zu verhalten, denn Team Chaos muss nun versuchen die gegnerischen Spieler zu ermitteln.

Das Spiel endet, sobald Team Chaos alle Mitglieder von Team Unheil entlarvt und verbannt hat ODER das Team Unheil mindestens genauso viele Mitglieder hat, wie das Team Chaos.